羊水细胞培养在产前诊断中的应用价值论文

资料与方法

一般资料 选择2017年4月～2017年4月在本院产科就诊的具有产前诊断指征的178例孕妇， 年龄20～47岁， 孕周16～25周， 有70例孕妇唐氏综合征筛查为阳性， 23例孕妇有异常生育史， 60例孕妇年龄≥35岁， 14例妇女于早孕服药， 6例孕妇神经管急性筛查为阳性， 5例孕妇丈夫染色体异常。

方法

羊膜穿刺 经b超定位后， 在无菌条件下， 用一次性羊水穿刺针行羊膜穿刺术。舍弃最开始的2 ml羊水， 再抽取20～30 ml的羊水放入2支无菌离心试管中。

羊水细胞培养 以1000 r/min的离心速度将2支无菌试管中的羊水进行离心处理达10 min， 舍弃上层清液， 保留管内沉淀细胞和0.5 ml羊水， 加入20%胎牛血清及含张氏成分的5 ml f10培养基， 用细管使之混匀， 将其接种于t-25的无菌试管中， 在37℃有5%二氧化碳培养环境中进行培育， 5 d后观察细胞生长情况， 若发现纤维状或者梭状细胞生长是， 则可更换5 ml新鲜培养液进行传代培养[2]。

收获细胞并进行制片 在对羊水细胞进行培养6～7 d后， 在倒置的显微镜下对正在培养的羊水细胞进行观察， 观察其生长情况， 发现有不同大小的梭长形细胞正在进行克隆并生长， 每个克隆过的细胞其生长状态良好并且已经形成细胞岛。对培养皿中的培养液进行定时的更换， 每天对细胞进行观察， 在观察2～3 d后， 发现每个形成的细胞岛已经逐渐长成为透亮细胞， 这些细胞较大， 细胞融合度达到70%～80%， 并且数目不等， 形状多呈圆形或类圆形， 这时即可对细胞进行收获。在对细胞进行收获的前1 d， 更换新鲜培养液， 在培养液中加入秋水仙素， 使其浓度达到0.1 mg/ml， 在4～5 h后， 使用显微镜观察， 发现培养液中出现大量的呈鱼眼状的细胞时， 即可对细胞终止培养并进行收获。加入0.25%的2 ml胰酶消化液， 在37℃的环境下放置5 min， 使得瓶壁上细胞脱落， 再以1500r的转速离心处理8 min， 弃上清液。加入1.5 ml的0.4%枸缘酸钠和0.4%的氯化钾混合液低渗7 min， 滴片， 常规g显带。每张玻片有20～30个细胞分裂相， 进行染色体核型分析， 每例分析核型5个。

核型统计分析 使用显微镜对细胞核型进行观察， 常规技术分散良好的细胞核型有30个中期分裂相， 细胞核型计数发生异常的则有50个分裂相， 如出现≥2个细胞核型计数异常， 则对所有分裂相进行计数， 使用染色体核型分析软件对核型图像进行采集， 对3～5个核型进行分析， 并完成报告， 为遗传咨询提供意见。